SMYD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403129-ACT

SMYD2 codifica uma lisina metiltransferase contendo domínios SET e MYND, que modula o estado da cromatina e a função de proteínas por meio de mono- e dimetilação de substratos histônicos e não histônicos. Ao influenciar programas transcricionais, respostas a danos no DNA e o controle do ciclo celular, a SMYD2 integra a regulação epigenética com vias de sinalização que moldam a proliferação e a adaptação ao estresse celular. Entre os substratos descritos estão reguladores da estabilidade do genoma e da sinalização de checkpoints, vinculando a atividade de SMYD2 a redes oncogênicas e a estados de diferenciação alterados observados em múltiplos contextos tumorais. Consequentemente, a SMYD2 é amplamente estudada como um nó que conecta remodelamento de cromatina, controle transcricional e metilação do proteoma em processos biológicos relevantes para doenças.

SMYD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMYD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMYD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMYD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMYD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMYD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMYD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMYD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMYD2 em células tumorais com expressão de SMYD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.