SMCHD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404142-ACT

SMCHD1 (structural maintenance of chromosomes flexible hinge domain containing 1) é um regulador epigenético que sustenta interações de cromatina de longo alcance e repressão transcricional estável em todo o genoma. Em células humanas, o SMCHD1 contribui para a arquitetura de ordem superior da cromatina, para a manutenção da metilação do DNA em loci selecionados e para o silenciamento de elementos repetitivos, atuando na interface com a inativação do cromossomo X e com programas mais amplos de compactação da cromatina. Sua atividade influencia redes de expressão gênica que governam a diferenciação e a estabilidade do genoma por meio do remodelamento da cromatina e de processos associados à heterocromatina. Alterações na função do SMCHD1 estão ligadas à desregulação do controle epigenético em distúrbios como a distrofia muscular facioescapuloumeral tipo 2 e a síndrome de Bosma (arínia e microftalmia), o que o torna um alvo importante para estudos mecanísticos de regulação gênica mediada pela cromatina.

SMCHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMCHD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMCHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMCHD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMCHD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMCHD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMCHD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMCHD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMCHD1 em células tumorais com expressão de SMCHD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.