SMC4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405067-ACT

SMC4は、染色体構造維持（SMC）ファミリーに属する中核的なATPaseをコードしており、SMC2とともに、体細胞分裂期の染色体凝縮、姉妹染色分体の分離、そして正確な染色体分配に必須なコンデンシン複合体の触媒的足場を形成します。ATP依存的なDNAループ押し出し（loop extrusion）と高次クロマチン構造の形成を介して、SMC4は複製に伴うクロマチン動態、DNA損傷応答の協調、ならびにゲノム安定性の維持を支えます。SMC4の発現や機能の異常は、複数の腫瘍で観察される染色体不安定性や異常増殖表現型と関連しており、異数性や細胞周期チェックポイント制御を研究するうえで有用な標的（ノード）となります。さらに、SMC4依存的なクロマチン構築は、有糸分裂やストレス応答に関連する転写プログラムにも影響し、染色体構造と遺伝子発現制御をつなぐ機構的な橋渡しを提供します。

SMC4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMC4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMC4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMC4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMC4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。