SMC1α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402865-ACT

SMC1A codifica a proteína de manutenção estrutural dos cromossomos 1α (SMC1α), um componente central do complexo coesina que controla a coesão entre cromátides-irmãs, a segregação cromossômica e a organização da cromatina em níveis superiores. Por meio da extrusão de alças de DNA dependente de coesina e da coordenação com CTCF, a SMC1α influencia a regulação transcricional, o timing da replicação do DNA e a manutenção da estabilidade do genoma. A SMC1α também participa da sinalização e do reparo de danos no DNA, sustentando respostas de checkpoint ao estresse replicativo e a quebras de dupla fita. A desregulação ou mutação de SMC1A e de componentes da via da coesina está associada a coesinopatias e tem sido implicada na instabilidade genômica e em programas de expressão gênica alterados relevantes para a biologia do câncer.

SMC1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMC1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMC1α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMC1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMC1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMC1α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMC1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMC1α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMC1α em células tumorais com expressão de SMC1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.