Plasmide Double Nickase (h) Smad2: sc-400475-NIC

Le gène humain **SMAD2** code Smad2, un SMAD régulé par les récepteurs qui transmet les signaux du **TGF-β** et de l’**activine/NODAL** depuis les récepteurs de type I vers le noyau, où il s’associe à **SMAD4** pour moduler des programmes transcriptionnels contrôlant la régulation du cycle cellulaire, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation immunitaire. L’activité de Smad2 est façonnée par la phosphorylation de son extrémité C-terminale, les navettes nucléocytoplasmiques et le dialogue avec les voies **MAPK** et **PI3K/AKT**, intégrant des signaux de croissance et de stress dépendants du contexte. Une dérégulation de la signalisation **SMAD2** a été impliquée dans des altérations des dynamiques épithélio-mésenchymateuses, le remodelage fibrotique, des états transcriptionnels associés à l’inflammation et la biologie tumorale, via une perturbation des sorties canoniques de la voie TGF-β. En tant que nœud central de la signalisation de la superfamille TGF-β, **SMAD2** est fréquemment étudié afin d’analyser l’architecture de la voie, l’assemblage des complexes transcriptionnels et les réponses des réseaux géniques en aval.

Smad2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SMAD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SMAD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SMAD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SMAD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.