Plasmide CRISPR d'Activation (h) Slfn5: sc-408333-ACT

SLFN5 humain (Schlafen family member 5) code Slfn5, une protéine nucléaire stimulée par l’interféron qui module des programmes transcriptionnels liés à la signalisation immunitaire innée et à la régulation de l’état cellulaire. Slfn5 a été impliquée dans le contrôle des réseaux de gènes de réponse à l’interféron, en influençant des processus associés à la chromatine et l’activité de facteurs de transcription qui façonnent les réponses antivirales et inflammatoires. Une expression altérée de SLFN5 a été associée à la prolifération et à la migration des cellules tumorales, ainsi qu’à la signalisation du microenvironnement immunitaire, dans plusieurs contextes cancéreux, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique reliant les voies de l’interféron à des phénotypes oncogéniques. SLFN5 est donc largement étudié dans des modèles d’infection, d’inflammation et de biologie des cancers afin d’analyser comment la répression ou l’activation transcriptionnelle induite par l’interféron influence la fitness cellulaire.

Slfn5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLFN5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Slfn5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLFN5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLFN5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Slfn5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLFN5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Slfn5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Slfn5 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLFN5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.