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SLC43A1CRISPR激活质粒(h) | sc-417236-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
SLC43A1CRISPR激活质粒(h2) | sc-417236-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
SLC43A1 编码一种不依赖钠离子的“大中性氨基酸转运体”(LAT3),可促进细胞摄取支链氨基酸及其他必需氨基酸,从而支持营养感知与合成代谢。通过调节细胞内氨基酸的可用性,SLC43A1 影响与 mTORC1 相关的信号传导、蛋白质合成,以及细胞在增殖与分化状态下的代谢适应。已有研究在代谢重编程和肿瘤相关的营养获取等情境中报道了 SLC43A1 表达的改变,其中转运体活性可塑造细胞的生长与应激反应。这些特征使 SLC43A1 成为研究氨基酸转运动力学、代谢通路串扰,以及营养转运体网络转录调控的一个有用节点。
SLC43A1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC43A1的表达。
SLC43A1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC43A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC43A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SLC43A1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC43A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于SLC43A1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC43A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SLC43A1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。