SLC35A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408155-ACT

SLC35A2 codifica um transportador de UDP-galactose localizado no aparelho de Golgi, que importa galactose ativada do citosol para o lúmen do Golgi, a fim de sustentar a galactosilação de glicanos N‑ e O‑ligados e de glicolipídios. Ao controlar a disponibilidade de açúcares nucleotídicos, SLC35A2 influencia a maturação de glicoproteínas, a função de receptores na superfície celular, o tráfego vesicular e a homeostase da via secretora. Alterações na atividade de SLC35A2 têm sido associadas a defeitos na glicosilação de proteínas, com efeitos a jusante sobre a sinalização celular e o desenvolvimento tecidual, e o gene é frequentemente estudado no contexto de distúrbios congênitos da glicosilação e da biologia de mutações em mosaico. Portanto, este gene é relevante para pesquisas sobre mecanismos dependentes de glicanos que moldam a adesão, o reconhecimento imune e a estabilidade de proteínas de membrana.

SLC35A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC35A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC35A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC35A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC35A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC35A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC35A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC35A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC35A2 em células tumorais com expressão de SLC35A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.