SIRT6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424467-ACT

O gene Sirt6 de camundongo codifica a SIRT6, uma desacilase nuclear dependente de NAD+ que regula a estrutura da cromatina e a transcrição por meio das atividades de desacetilação da histona H3 e de ADP-ribosilação. A SIRT6 integra a percepção metabólica com a manutenção do genoma ao modular o reparo de quebras de dupla fita do DNA, a estabilidade dos telômeros e as respostas ao estresse de replicação, além de influenciar o metabolismo de glicose e lipídios por meio do controle de programas gênicos glicolíticos e inflamatórios. Funcionalmente, a SIRT6 interage com vias que envolvem a sinalização de NF-κB, respostas ao estresse oxidativo e remodelamento de cromatina, moldando o envelhecimento celular e a resiliência ao estresse. A atividade desregulada de SIRT6 tem sido associada em pesquisas a fenótipos relacionados ao envelhecimento, desequilíbrio metabólico e estados inflamatórios, tornando-a um nó-chave para estudos mecanísticos em sistemas murinos.

SIRT6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sirt6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sirt6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sirt6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sirt6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT6 em células tumorais com expressão de Sirt6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.