SIRT4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401187-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIRT4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIRT4 Double Nickase Plasmid (h) e il SIRT4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SIRT4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIRT4 Antibody (95.1): sc-135797
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIRT4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT4 codifica una sirtuina mitocondriale che utilizza NAD+ per regolare le modificazioni post-traduzionali, collegando lo stato redox cellulare al controllo metabolico. SIRT4 modula la selezione dei substrati energetici mitocondriali attraverso l’inibizione della glutammato deidrogenasi e la regolazione dell’anaplerosi degli amminoacidi, con effetti a valle sul ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA), sulla fosforilazione ossidativa e sull’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno. Influenza inoltre il metabolismo lipidico, le vie di secrezione dell’insulina e le risposte cellulari allo stress tramite una segnalazione mitocondriale coordinata. Un’attività disregolata di SIRT4 è stata associata a fenotipi metabolici alterati ed è stata studiata in contesti quali il metabolismo del cancro, la neurodegenerazione e modelli di malattie cardiometaboliche.
SIRT4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SIRT4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SIRT4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SIRT4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SIRT4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.