SIRT3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400675-NIC

SIRT3 kodiert eine mitochondriale, NAD⁺-abhängige Deacetylase, die die Proteinacetylierung reguliert, um oxidativen Stoffwechsel, Redox-Gleichgewicht und die mitochondriale Qualitätskontrolle zu koordinieren. Durch die Deacetylierung von Zielproteinen, die am TCA-/Citratzyklus, an der β‑Oxidation von Fettsäuren und an der antioxidativen Abwehr beteiligt sind, beeinflusst SIRT3 die ATP-Produktion, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und Stressanpassungswege. Die SIRT3-Aktivität überschneidet sich mit Programmen der Nährstoffsensorik und der mitochondrialen Homöostase, einschließlich AMPK- und PGC‑1α-gekoppelter metabolischer Umprogrammierung sowie mit mitophagieassoziierten Prozessen. Eine fehlregulierte SIRT3-abhängige Deacetylierung wurde mit veränderter mitochondrialer Funktion in Verbindung gebracht, wie sie bei Stoffwechselstörungen, Neurodegeneration, kardiovaskulären Stressantworten und der krebsassoziierten metabolischen Neuverdrahtung beobachtet wird, was ihre breite Relevanz für die Krankheitsbiologie unterstreicht.

SIRT3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SIRT3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SIRT3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SIRT3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SIRT3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.