Shc CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400914-ACT

SHC1はShcアダプタータンパク質をコードしており、活性化した受容体型チロシンキナーゼ（RTK）やサイトカイン受容体から、RAS–MAPK/ERKやPI3K–AKTを含む下流カスケードへとシグナルをつなぐ中心的なシグナル伝達因子です。ShcはPTBドメインおよびSH2ドメインを介して、リン酸化依存的なシグナル複合体の組み立てを調整し、増殖、分化、生存、ならびに細胞ストレス応答を制御します。SHC1依存的シグナルはインスリン／IGF経路とも連携し、ミトコンドリア機能や酸化ストレスシグナルにも影響を与えることで、状況依存的な細胞増殖やアポトーシスの変化に寄与します。SHC1／Shcシグナルの破綻は、がん生物学における増殖因子経路活性の異常と関連づけられているほか、代謝や神経変性に関する研究モデルにおいてもシグナル動態の変化と関連して報告されています。

Shc CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SHC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Shc CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SHC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSHC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Shcの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSHC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるShc依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSHC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるShc経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。