SH-PTP2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422503-NIC

O Ptpn11 de camundongo codifica a SH-PTP2 (SHP2), uma fosfatase de tirosina proteica citoplasmática com domínios SH2 em tandem que retransmite sinais provenientes de receptores tirosina-quinase, receptores de citocinas e receptores imunológicos inibitórios. Ao desfosforilar proteínas de ancoragem-chave e modular complexos de adaptadores, a SH-PTP2 promove a sinalização RAS–MAPK/ERK e pode influenciar a dinâmica das vias PI3K–AKT e JAK–STAT, moldando respostas de proliferação, diferenciação e migração. A atividade de Ptpn11 contribui para programas de sinalização do desenvolvimento e da hematopoiese, e a desregulação de redes dependentes de SH-PTP2 é amplamente estudada em modelos de sinalização aberrante por fatores de crescimento e de função de células imunes. Como regulador nodal da sinalização por fosfotirosina, Ptpn11 é frequentemente utilizado para investigar crosstalk entre vias, controle por feedback e transdução de sinal específica de contexto em células e tecidos de camundongo.

SH-PTP2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ptpn11 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ptpn11. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ptpn11. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ptpn11 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.