Septin 7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401655-ACT

ヒトのSEPT7はセプチン7をコードしており、拡散バリアおよび細胞骨格の足場として機能するヘテロオリゴマー性セプチンフィラメントの中核構成要素である。セプチン7はアクチンと微小管の配置を協調的に制御し、細胞質分裂、細胞極性、膜リモデリング、小胞輸送を支えるほか、細胞分裂時のミッドボディ構造にも寄与する。これらの役割を通じて、SEPT7は増殖や遊走に関連するプロセスに影響を及ぼし、がん生物学や神経炎症・神経変性疾患の機序で観察される細胞骨格の制御異常との関連でしばしば研究されている。さらに、セプチン複合体内での相互作用により、SEPT7は皮質の安定性、細胞形態の制御、膜タンパク質の区画化を司る経路とも結び付けられている。

Septin 7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEPT7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Septin 7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEPT7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEPT7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Septin 7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEPT7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSeptin 7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEPT7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSeptin 7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。