SEMA3F CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403710-ACT

SEMA3F は、分泌型のガイダンス因子であるセマフォリン3Fをコードしており、主にニューロピリンおよびプレキシン受容体を介してシグナルを伝達し、細胞骨格の再構築、方向性のある細胞移動、軸索誘導を制御します。非神経組織においても、SEMA3F は細胞間コミュニケーション、接着ダイナミクス、血管パターニングを制御する経路に関与し、組織構築や微小環境シグナル伝達といった過程と結び付けられています。SEMA3F の発現変化は、がん生物学における運動性の破綻や浸潤性挙動と関連づけられており、また、ガイダンス因子が回路形成や免疫—神経間クロストークを形作る神経発生・神経炎症の文脈でも研究されています。リガンド依存的にセマフォリンシグナルを調節する因子として、SEMA3F は受容体媒介性の誘導・移動プログラムを解析するための扱いやすい標的（ノード）となります。

SEMA3F CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEMA3Fの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SEMA3F CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEMA3F 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEMA3F転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SEMA3Fの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEMA3F遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSEMA3F依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEMA3F発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSEMA3F経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。