SDHA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401689-ACT

SDHAは、コハク酸をフマル酸へ酸化し、電子をユビキノンへ受け渡すことで、トリカルボン酸（TCA）回路と電子伝達系を結び付けるミトコンドリア複合体IIの中核的な触媒サブユニットである、コハク酸脱水素酵素複合体フラボタンパク質サブユニットAをコードします。酸化的リン酸化およびレドックス恒常性における役割を通じて、SDHAは細胞のATP産生、ミトコンドリア代謝、活性酸素種（ROS）バランスに影響を与えます。SDHA機能の変化は、生体エネルギーのフラックスや代謝物シグナル伝達を乱し、その結果として低酸素応答やミトコンドリアストレス経路に下流の影響を及ぼし得ます。SDHAの遺伝学的・機能的な攪乱は、ミトコンドリア病の表現型やSDH欠損腫瘍の生物学と関連付けられており、代謝研究およびがん研究におけるモデル標的としての有用性を支持します。

SDHA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SDHAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SDHA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SDHA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSDHA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SDHAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSDHA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSDHA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSDHA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSDHA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。