Sclerostin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401527

概要

SOSTはスクレロスチンをコードする遺伝子であり、スクレロスチンは主に骨細胞（osteocyte）によって産生される分泌性糖タンパク質で、骨形成の主要な負の制御因子として働きます。スクレロスチンはLRP5/6共受容体に結合してカノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達を阻害し、その結果、骨芽細胞の分化、骨基質の沈着、ならびに骨格リモデリングを調節します。Wnt駆動性の転写プログラムを制御することを通じて、SOSTは骨芽細胞と破骨細胞のカップリングやミネラル恒常性にも影響を与えます。SOST活性の制御異常は骨量表現型の変化と関連し、骨粗鬆症の生物学、骨格異形成、さらに炎症性・代謝性疾患で観察される骨リモデリングの変化といった文脈で頻繁に研究されています。

Sclerostin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSOST遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SOST内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SOSTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sclerostinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sclerostinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SOST欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sclerostinの機能に不可欠なSOSTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SOSTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sclerostin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSclerostin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SOST遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sclerostin HDRプラスミド（h）および Sclerostin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSOSTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSOST標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。