Sc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420099

概要

マウスSparcl1はSc1をコードしており、Sc1はSPARCファミリーに属する分泌性のマトリセルラー糖タンパク質で、細胞外マトリックス（ECM）の組織化や細胞―マトリックス接着を調節します。Sc1は、インテグリンシグナル伝達、フォーカルアドヒージョンの動態、ならびに組織リモデリングプログラムに影響を与えることで、細胞の遊走・増殖・分化の制御に寄与します。血管系および間質の文脈では、SPARCL1は血管新生の調節や内皮細胞―平滑筋細胞相互作用に関与するとされ、線維化、炎症に伴うリモデリング、腫瘍微小環境の生物学において発現変動が報告されています。これらの特性によりSparcl1は、組織構築や疾患関連の間質表現型を形作るECM依存的シグナル伝達ネットワークを研究するうえで有用な標的となります。

Sc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSparcl1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sparcl1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sparcl1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sc1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sc1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sparcl1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sc1の機能に不可欠なSparcl1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sparcl1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSc1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sparcl1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sc1 HDRプラスミド（m）および Sc1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSparcl1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSparcl1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。