SARP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402848-ACT

ヒトSFRP5は、分泌型フリズルド関連タンパク質5（SARP3）をコードしています。SARP3は可溶性のWntシグナル調節因子で、Wntリガンドに結合し、Frizzled受容体の活性化に影響を与え得ます。SARP3は、カノニカルなβカテニン依存性転写と、ノンカノニカルなWnt/PCP経路の出力を調整することで、細胞運命決定、増殖、組織恒常性の制御に寄与します。SFRP5発現の変化は、代謝・炎症の文脈やがん関連のシグナルネットワークにわたって観察されるWnt経路活性の破綻と関連づけられており、経路摂動研究における有用なノードとなっています。細胞外のWnt調節因子として、SARP3はストローマ—上皮間コミュニケーションや、微小環境に焦点を当てたモデルにおけるシグナル減衰への影響という観点からもしばしば検討されます。

SARP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SFRP5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SARP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SFRP5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSFRP5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SARP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSFRP5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSARP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSFRP5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSARP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。