Plasmide CRISPR d'Activation (h) SARP3: sc-402848-ACT

Le gène humain **SFRP5** code la protéine sécrétée **secreted frizzled-related protein 5 (SARP3)**, un modulateur soluble de la signalisation Wnt qui se lie aux ligands Wnt et peut influencer l’activation des récepteurs Frizzled. En modulant à la fois la transcription canonique dépendante de la **β‑caténine** et les sorties non canoniques de la voie **Wnt/PCP**, SARP3 contribue à réguler les décisions de destinée cellulaire, la prolifération et l’homéostasie tissulaire. Des altérations de l’expression de SFRP5 ont été associées à une activité dérégulée de la voie Wnt observée dans des contextes métaboliques et inflammatoires ainsi que dans des réseaux de signalisation liés au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études de perturbation de voie. En tant que régulateur extracellulaire de Wnt, SARP3 est souvent étudiée pour ses effets sur la communication stroma‑épithélium et l’atténuation des signaux dans des modèles centrés sur le microenvironnement.

SARP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFRP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SARP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFRP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFRP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SARP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFRP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SARP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SARP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SFRP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.