Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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Sar1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422799
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Sar1a O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Sar1a, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Sar1a Anticorpo (K-44): sc-130463
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Sar1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422799 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Sar1a codifica a pequena GTPase SAR1A, um iniciador essencial da formação de vesículas revestidas por COPII nos sítios de saída do retículo endoplasmático, impulsionando o tráfego do RE para o Golgi. Ao alternar entre os estados ligados a GDP e a GTP, a SAR1A promove a curvatura da membrana e recruta os complexos SEC23/SEC24 e SEC13/SEC31, sustentando o fluxo da via secretória e a proteostase. O tráfego dependente de Sar1a influencia o processamento de lipídios e lipoproteínas, a secreção de matriz extracelular e a entrega de receptores à superfície celular, ligando-o a uma ampla regulação de programas de sinalização e diferenciação. A disrupção do transporte mediado por COPII e da homeostase do RE está implicada em respostas ao estresse e em patologia relevante para fenótipos de desenvolvimento e metabólicos, tornando Sar1a um ponto útil para estudos mecanísticos de biologia dependente de secreção.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Sar1a (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sar1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sar1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sar1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Sar1a.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sar1a para a investigação da sinalização de Sar1a, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sar1a críticos para a função Sar1a
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sar1a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Sar1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Sar1a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sar1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Sar1a Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Sar1a (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sar1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sar1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.