SAMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-414066

概要

ヒトのSLC25A26は、SAMC（S-アデノシルメチオニン・ミトコンドリアキャリア）をコードしており、ミトコンドリア内膜に存在するトランスポーターとしてS-アデノシルメチオニン（SAM）をマトリックスへ取り込み、ミトコンドリア内のメチル化反応を維持します。SAMCは、RNA・タンパク質・代謝物のメチルトランスフェラーゼにSAMを供給することで、ミトコンドリア遺伝子発現、酸化的リン酸化の恒常性、ならびにレドックスに連動した代謝適応を支えます。ミトコンドリアへのSAM輸送が障害されると、細胞質とミトコンドリア間のワンカーボン代謝の協調が乱れ、mtDNA/mtRNAのプロセシングや呼吸鎖機能が変化し得ます。SLC25A26の活性に影響するバリアントはミトコンドリア機能不全の表現型と関連付けられており、本遺伝子はミトコンドリア病の生物学や代謝ストレス応答の機構研究において重要です。

SAMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC25A26遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC25A26内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC25A26のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SAMCタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SAMCシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC25A26欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SAMCの機能に不可欠なSLC25A26エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC25A26ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SAMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSAMC CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC25A26遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SAMC HDRプラスミド（h）および SAMC HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC25A26ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC25A26標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。