S-100A16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406149-ACT

S100A16 codifica a S-100A16, uma pequena proteína ligante de cálcio do tipo EF-hand da família S100, que conecta a dinâmica intracelular de Ca²⁺ à sinalização celular e à organização do citoesqueleto. Ao modular interações proteína–proteína de modo dependente de cálcio, a S-100A16 tem sido associada a processos como motilidade celular, diferenciação e programas transcricionais responsivos ao estresse. A expressão desregulada de S100A16 foi relatada em múltiplos contextos de doença, incluindo cânceres e fenótipos fibróticos ou metabólicos, nos quais pode influenciar a plasticidade epitélio–mesenquimal e a remodelação do microambiente. Essas características tornam a S-100A16 um alvo útil para estudar redes de sinalização reguladas por cálcio e transições fenotípicas em células humanas.

S-100A16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

S-100A16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de S-100A16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de S-100A16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via S-100A16 em células tumorais com expressão de S100A16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.