RyR-3 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-422776-ACT-2

マウスRyr3はリアノジン受容体3（RyR-3）をコードしており、RyR-3は主に小胞体／筋小胞体に局在する細胞内Ca2+放出チャネルとして、カルシウム誘発性カルシウム放出を媒介し、細胞質カルシウムトランジェントの形成に関与する。RyR-3依存的なCa2+シグナル伝達は、カルシウム恒常性、ミトコンドリアとの機能的カップリング、ならびに下流のCaMK/CREB関連経路などのプロセスを調節することで、興奮収縮連関、シナプス可塑性、活動依存的な遺伝子発現制御に寄与する。モデル系では、RyR-3機能の変化やリアノジン受容体を介したカルシウムリークが、神経発達および神経変性の表現型、発作感受性、筋生理の異常と関連づけられている。マウスにおけるRyr3の標的編集は、細胞内カルシウム動態、電気生理、ERストレス応答の機構研究を支えるとともに、神経・筋細胞モデルおよびin vivoの遺伝子回路における機能検証を可能にする。

RyR-3 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ryr3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RyR-3 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Ryr3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRyr3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RyR-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRyr3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRyR-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRyr3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRyR-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。