Plasmide CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m): sc-422515
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RPTPα Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RPTPα, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RPTPα Antibody (H-4): sc-398203
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m) | sc-422515 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Ptpra** code la phosphatase tyrosine protéique de type récepteur alpha (**RPTPα**), une phosphatase transmembranaire qui module la signalisation en déphosphorylant des résidus tyrosine inhibiteurs sur les kinases de la famille Src et sur des substrats apparentés. Par cette activité, elle influence l’adhésion médiée par les intégrines, la dynamique des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et la signalisation MAPK/ERK en aval, qui façonnent collectivement les programmes de prolifération, de migration et de différenciation. RPTPα intervient également dans le dialogue croisé avec les récepteurs à activité tyrosine kinase et peut ajuster les seuils de signalisation dans des contextes neuronaux et liés au système immunitaire. Une dérégulation de la signalisation de **Ptpra** a été associée à des processus pertinents pour la transformation oncogénique et le comportement invasif, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques sur l’équilibre kinase/phosphatase dans des voies associées aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RPTPα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptpra dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptpra, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptpra à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RPTPα.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptpra pour l'étude de la signalisation de RPTPα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ptpra essentiels à la fonction de RPTPα
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptpra pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RPTPα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RPTPα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptpra. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RPTPα plasmide HDR (m) et le RPTPα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptpra pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptpra définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.