RPTPα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422515

概要

マウスのPtpraは、受容体型プロテインチロシンホスファターゼα（RPTPα）をコードしており、Srcファミリーキナーゼおよび関連基質上の阻害性チロシン残基を脱リン酸化することでシグナル伝達を調節する膜貫通型のホスファターゼです。この活性を通じて、インテグリン媒介性の接着、フォーカルアドヒージョンの動態、細胞骨格リモデリング、ならびに下流のMAPK/ERKシグナル伝達に影響を与え、増殖・遊走・分化プログラムを総合的に形作ります。RPTPαはまた受容体型チロシンキナーゼとのクロストークにも関与し、神経系や免疫関連の文脈においてシグナルの閾値を調整し得ます。Ptpraシグナルの破綻は、がん化や浸潤性行動に関連する過程と結び付けられており、疾患関連経路におけるキナーゼ／ホスファターゼのバランスを機構的に解析するための有用な結節点となります。

RPTPα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPtpra遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ptpra内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ptpraのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RPTPαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RPTPαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ptpra欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RPTPαの機能に不可欠なPtpraエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ptpraゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RPTPα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRPTPα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ptpra遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RPTPα HDRプラスミド（m）および RPTPα HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPtpraホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPtpra標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。