RPL29 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403879-ACT

RPL29はリボソームタンパク質L29をコードしており、60S大サブユニットの塩基性構成要素として、リボソームの組み立ておよび細胞質におけるmRNAの効率的な翻訳に寄与します。タンパク質合成の中核機構の一部として、RPL29はプロテオスタシスと細胞増殖プログラムを支え、これらはリボソーム生合成と翻訳制御に密接に連動しています。RPL29を含むリボソームタンパク質の発現変動は、増殖制御の破綻やストレス適応を伴う状態でしばしば認められ、全体的および選択的な翻訳の変化を介して細胞表現型に影響し得ます。そのためRPL29は、リボソームの組成や翻訳能が細胞周期制御、代謝リプログラミング、ストレス応答経路とどのように結び付くのかを研究するうえで有用な結節点となります。

RPL29 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RPL29の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RPL29 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RPL29 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRPL29転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RPL29の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRPL29遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRPL29依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRPL29発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRPL29経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。