RPA40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404594

概要

POLR1CはRPA40をコードしており、RPA40はRNAポリメラーゼIおよびRNAポリメラーゼIIIに共通のサブユニットとして、これらの転写複合体の組み立てと安定性を支えます。Pol IによるrRNA合成、およびPol IIIによるtRNAやその他の小分子非コードRNAの転写における役割を通じて、RPA40はリボソーム生合成、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）、ならびに細胞増殖の制御に寄与します。POLR1Cに関連する転写産物の産生が障害されると、核小体機能や細胞ストレス応答が変化し得るため、この因子は増殖や分化に影響する経路とも結び付けられます。POLR1Cの変異は、髄鞘や頭蓋顔面の発生に影響する遺伝性疾患との関連が報告されており、ヒト生物学におけるPol I/IIIの健全性の重要性を示しています。

RPA40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOLR1C遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLR1C内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLR1Cのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RPA40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RPA40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLR1C欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RPA40の機能に不可欠なPOLR1Cエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POLR1Cゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RPA40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRPA40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLR1C遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RPA40 HDRプラスミド（h）および RPA40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLR1Cホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLR1C標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。