RP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405790

概要

RP1L1（RP1-like 1）は、光受容体細胞に豊富に発現する微小管結合タンパク質をコードしており、連結繊毛および外節に存在する軸糸性細胞骨格の構築と安定化を支えます。微小管や繊毛構造との関連を介して、RP1L1は光受容体の形態形成、外節ディスクの整列、ならびに視覚の光情報変換に不可欠な輸送過程に寄与します。RP1L1機能の破綻は、黄斑ジストロフィーなどの表現型を含む遺伝性網膜変性と関連しており、網膜構造の維持と視覚シグナル伝達の健全性における役割を示しています。そのためRP1L1は、繊毛依存的な細胞骨格制御、区画化されたタンパク質輸送、そして光受容体が脆弱化する機序を研究するうえで重要な対象です。

RP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRP1L1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RP1L1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RP1L1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RP1L1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RP1L1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RP1L1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RP1L1の機能に不可欠なRP1L1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RP1L1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRP1L1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RP1L1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RP1L1 HDRプラスミド（h）および RP1L1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRP1L1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRP1L1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。