Rock-2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422695-ACT

Mouse Rock2は、Rho関連コイルドコイル含有プロテインキナーゼ2（ROCK2）をコードする。ROCK2はセリン／スレオニンキナーゼであり、RhoAの主要なエフェクターとして機能して、アクトミオシン収縮性、ストレスファイバー形成、フォーカルアドヒージョン（接着斑）ダイナミクスを制御する。ROCK2はMYPT1やLIMKなどの基質をリン酸化し、ミオシン軽鎖活性やコフィリン依存性のアクチン再構築を調節することで、細胞形態、極性、遊走に影響を与える。これらの細胞骨格プログラムを通じて、Rock2は細胞質分裂、神経突起伸長、血管平滑筋トーヌスなどの過程に関与し、線維化、炎症、神経変性、ならびにがんの浸潤・転移の文脈で頻繁に研究されている。Rho GTPaseシグナル伝達やメカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）との経路連結性により、Rock2は細胞骨格張力が転写や細胞外マトリックスのシグナルとどのように結び付くかを解析するための、汎用的な結節点として広く用いられている。

Rock-2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Rock2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rock-2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Rock2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRock2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rock-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRock2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRock-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRock2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRock-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。