Plasmide Double Nickase (h) Rock-1: sc-400367-NIC

Le gène humain **ROCK1** code la kinase 1 associée à Rho (Rock-1), une sérine/thréonine kinase qui agit comme un effecteur majeur de RhoA pour réguler la contractilité actine–myosine, la formation de fibres de stress, la dynamique des adhésions focales et la polarité cellulaire. Rock-1 phosphoryle des substrats tels que MYPT1 et LIMK, reliant la signalisation des GTPases Rho à la phosphorylation de la chaîne légère de la myosine, à la régulation de la cofiline et au remodelage du cytosquelette lors de la migration, de la cytokinèse et de l'apoptose. Par ces processus, ROCK1 influence la plasticité épithélio-mésenchymateuse, la fonction de barrière et des voies de mécanotransduction, notamment des programmes dépendants de YAP/TAZ. Une activité dérégulée de ROCK1 a été associée au remodelage tissulaire pathologique, à la fibrose, au dysfonctionnement vasculaire, ainsi qu'à l'invasion et aux métastases des cellules tumorales, ce qui en fait une cible largement étudiée dans la recherche sur le cytosquelette et la voie Rho/ROCK.

Rock-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ROCK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ROCK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ROCK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ROCK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.