RNF31 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-412436-LAC

RNF31 umano codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che funge da nucleo catalitico del complesso di assemblaggio delle catene di ubiquitina lineare (LUBAC), generando catene di ubiquitina legate a Met1 che modulano la propagazione del segnale a valle dei recettori immunitari. Attraverso la regolazione di NF-κB e di reti di segnalazione infiammatoria correlate, RNF31 influenza le risposte citochiniche, la sopravvivenza cellulare e programmi trascrizionali di adattamento allo stress. L’ubiquitinazione lineare dipendente da RNF31 modula la stabilità dei complessi proteici sulle piattaforme di segnalazione recettoriale e contribuisce all’equilibrio tra vie pro-sopravvivenza e vie di morte cellulare. Un’attività deregolata di RNF31 e della segnalazione LUBAC è stata associata a infiammazione aberrante e a contesti di segnalazione oncogenica, sostenendone lo studio in immunità, apoptosi e biologia del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale RNF31 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RNF31 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RNF31 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RNF31, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RNF31. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RNF31 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.