Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (m): sc-420946
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RIP/Rab Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RIP/Rab, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RIP/Rab Antibody (H-2): sc-166651
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (m) | sc-420946 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Agfg1 code RIP/Rab, une ArfGAP qui couple la signalisation des facteurs d’ADP‑ribosylation (ARF) au trafic membranaire endocytique et à l’organisation du cytosquelette. En régulant les cycles des petites GTPases, RIP/Rab contribue à l’internalisation des récepteurs, au bourgeonnement des vésicules et au recyclage des endosomes vers la membrane plasmique, des processus qui modulent les sorties de signalisation des facteurs de croissance. La perturbation de ces nœuds de trafic peut altérer la polarité cellulaire, la migration et les réponses au stress, reliant ainsi les voies dépendantes d’Agfg1 à des phénotypes pertinents pour la neurobiologie et le comportement des cellules cancéreuses dans des systèmes modèles. Dans les études chez la souris, Agfg1 est donc utile pour explorer comment le trafic membranaire s’articule avec la transduction du signal et l’homéostasie cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RIP/Rab (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agfg1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agfg1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agfg1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RIP/Rab.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agfg1 pour l'étude de la signalisation de RIP/Rab, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Agfg1 essentiels à la fonction de RIP/Rab
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agfg1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RIP/Rab plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RIP/Rab plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agfg1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RIP/Rab plasmide HDR (m) et le RIP/Rab (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agfg1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agfg1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.