RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420946

概要

Agfg1はRIP/Rabをコードしており、これはADPリボシル化因子（ARF）シグナル伝達をエンドサイトーシス性の膜輸送および細胞骨格の構築と結び付けるArfGAPです。RIP/Rabは、小型GTPaseのサイクル制御を介して、受容体の内在化、小胞の出芽、エンドソームから細胞膜へのリサイクリングに寄与し、これらの過程は増殖因子シグナルの出力に影響します。こうした輸送の要所が破綻すると、細胞極性、遊走、ストレス応答が変化し、Agfg1依存経路がモデル系における神経生物学やがん細胞の挙動に関わる表現型と結び付くことが示唆されます。そのためマウス研究では、膜輸送がシグナル伝達や細胞恒常性とどのように交差するかを調べる上で、Agfg1は有用な標的となります。

RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgfg1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agfg1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agfg1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RIP/Rabタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RIP/Rabシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agfg1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RIP/Rabの機能に不可欠なAgfg1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agfg1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRIP/Rab CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agfg1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RIP/Rab HDRプラスミド（m）および RIP/Rab HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgfg1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgfg1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。