Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rieske FeS: sc-403504-ACT

UQCRFS1 code la protéine fer‑soufre de type Rieske, une sous-unité catalytique essentielle du complexe III mitochondrial (cytochrome bc1) qui transfère des électrons de l’ubiquinol vers le cytochrome c via son cluster 2Fe‑2S. Cette activité soutient la phosphorylation oxydative, le maintien du potentiel de membrane mitochondrial et le couplage du transport d’électrons à la translocation des protons. En influençant l’efficacité de la chaîne respiratoire, UQCRFS1 contribue à la production cellulaire d’ATP, à l’homéostasie rédox et à la signalisation des espèces réactives de l’oxygène (ROS) d’origine mitochondriale. La dérégulation de la fonction du complexe III et des variations d’expression de UQCRFS1 ont été associées à un stress bioénergétique mitochondrial, pertinent pour la recherche sur les maladies neurodégénératives, cardiovasculaires et métaboliques.

Rieske FeS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UQCRFS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rieske FeS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UQCRFS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UQCRFS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rieske FeS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UQCRFS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rieske FeS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rieske FeS dans les cellules tumorales présentant une expression de UQCRFS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.