Rictor Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429705-NIC

Rictor (companheiro do mTOR insensível à rapamicina) é um componente estrutural (scaffold) essencial do complexo mTOR 2 (mTORC2) em células de camundongo, coordenando a montagem do complexo e o recrutamento de substratos que permitem a fosforilação de quinases da família AGC, como AKT (Ser473), SGK1 e isoformas de PKC. Por meio da sinalização do mTORC2, o Rictor regula a sobrevivência celular, o metabolismo, a organização do citoesqueleto e a migração, integrando sinais de fatores de crescimento e do estado nutricional. Alterações na atividade de Rictor/mTORC2 estão associadas à desregulação da sinalização de insulina, a fenótipos proliferativos e invasivos anormais e ao remodelamento de respostas ao estresse em diversos contextos relevantes para doenças. Essas funções fazem do Rictor um alvo central para dissecar a organização da via PI3K–AKT e os programas transcricionais e do citoesqueleto a jusante em modelos de pesquisa biomédica.

Rictor O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Rictor em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Rictor. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Rictor. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Rictor interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.