Rho T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406496

概要

RHOT2は、ミトコンドリア外膜に固定された非典型的なRhoファミリーGTPアーゼであるRho T2（Miro2としても知られる）をコードしており、ミトコンドリアの輸送、細胞内での配置、品質管理の協調に寄与します。ミトコンドリアを微小管モーターに連結するアダプタータンパク質との相互作用を介して、RHOT2は細胞骨格依存的な輸送に関与し、エネルギー需要の高い細胞領域で必要とされるミトコンドリア分布を支えます。Rho T2はまた、ミトコンドリアのダイナミクスとターンオーバーのカルシウム感受性調節にも関与するとされ、ミトコンドリアの恒常性やストレス応答を制御する経路と交差します。RHOT2機能の破綻は、ミトコンドリアのダイナミクスや生体エネルギーの変化という観点から研究されており、これらの過程は神経変性やがんに関連する代謝リプログラミングとしばしば結び付けられます。

Rho T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHOT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHOT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHOT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rho T2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rho T2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHOT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rho T2の機能に不可欠なRHOT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHOT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rho T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRho T2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHOT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rho T2 HDRプラスミド（h）および Rho T2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHOT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHOT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。