Rho T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406496

Visão geral

RHOT2 codifica a Rho T2 (também conhecida como Miro2), uma GTPase atípica da família Rho ancorada na membrana externa mitocondrial, que ajuda a coordenar o tráfego, o posicionamento e o controle de qualidade das mitocôndrias. Por meio de interações com proteínas adaptadoras que conectam as mitocôndrias a motores de microtúbulos, RHOT2 contribui para o transporte dependente do citoesqueleto e sustenta a distribuição mitocondrial necessária para regiões celulares com alta demanda energética. A Rho T2 também está implicada na regulação, sensível ao cálcio, da dinâmica e da renovação mitocondriais, intersectando vias que governam a homeostase mitocondrial e respostas ao estresse. A desregulação da função de RHOT2 tem sido estudada no contexto de alterações na dinâmica mitocondrial e na bioenergética, processos frequentemente associados à neurodegeneração e à reprogramação metabólica relacionada ao câncer.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rho T2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RHOT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RHOT2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RHOT2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rho T2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RHOT2 para a investigação da sinalização de Rho T2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RHOT2 críticos para a função Rho T2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RHOT2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rho T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rho T2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RHOT2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rho T2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rho T2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RHOT2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RHOT2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.