Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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Rheb Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422675
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rheb Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Rheb, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rheb Antibody (80-R): sc-130398
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rheb Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422675 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene Rheb del topo codifica una piccola GTPasi correlata a Ras che funge da attivatore centrale di mTORC1 sulle membrane lisosomiali, integrando la segnalazione dei fattori di crescita, il sensing degli amminoacidi e lo stato energetico cellulare per regolare la sintesi proteica, l’autofagia e la crescita cellulare. Tramite il complesso TSC1/TSC2, l’attività di Rheb è strettamente controllata dalla via PI3K–AKT e da input responsivi allo stress, plasmando il metabolismo anabolico e l’omeostasi mitocondriale. Una segnalazione Rheb–mTORC1 deregolata è implicata in fenotipi del neurosviluppo, nella biologia tumorale e nel rimodellamento metabolico, rendendo Rheb un nodo ampiamente utilizzato per dissezionare la segnalazione nutritiva e il controllo della crescita. Nei sistemi murini, la perturbazione di Rheb supporta studi meccanicistici sui programmi di traduzione dipendenti da mTOR, sulla segnalazione associata ai lisosomi e sull’adattamento allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rheb (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rheb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rheb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rheb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rheb.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rheb per lo studio della segnalazione di Rheb, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Rheb critici per la funzione di Rheb
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rheb per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Rheb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rheb CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rheb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Rheb Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rheb (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rheb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rheb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.