RFX6 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-408496-LAC-2

O RFX6 humano (regulatory factor X6) codifica um fator de transcrição do tipo hélice-alada que se liga a motivos de DNA X-box para controlar programas gênicos necessários à especificação da linhagem endócrina pancreática e à maturação e manutenção das células β produtoras de insulina. Ele atua em redes transcricionais que governam o desenvolvimento das ilhotas, a secreção hormonal estimulada por glicose e vias regulatórias mais amplas que coordenam decisões de destino celular derivadas do endoderma. A interrupção genética ou a expressão desregulada de RFX6 tem sido associada a defeitos congênitos do pâncreas endócrino e a formas de diabetes, tornando-o um nó-chave para o estudo de mecanismos de diabetes monogênico e de disfunção de células das ilhotas. A edição gênica de RFX6 permite a investigação mecanística da regulação enhancer–promotor, da ocupação de cromatina e de circuitos gênicos endócrinos a jusante em modelos de diferenciação de células-tronco humanas e em sistemas relevantes para ilhotas pancreáticas.

As Partículas de Ativação Lentivirais RFX6 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RFX6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais RFX6 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RFX6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de RFX6. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RFX6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.