Plasmide Double Nickase (h) RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-400529-NIC

RARA code pour RARα, un récepteur nucléaire activé par un ligand qui forme un hétérodimère avec RXR afin de se fixer sur des éléments de réponse à l’acide rétinoïque et de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Via la signalisation des rétinoïdes, RARα coordonne, de manière dépendante du contexte, des processus tels que le développement embryonnaire, la différenciation épithéliale, le contrôle du cycle cellulaire et le remodelage de la chromatine. L’activité de RARα est modulée par la disponibilité du ligand et l’échange de corégulateurs, ce qui l’interface avec des voies gouvernant la répression/l’activation transcriptionnelle et l’engagement de lignée. Une dérégulation de la transcription dépendante de RARA et de la signalisation du récepteur a été associée à des états de différenciation altérés et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans des contextes hématopoïétiques et de tissus solides, ce qui étaye sa pertinence pour les études des mécanismes de maladie.

RARα/Retinoic Acid Receptor α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RARA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RARA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RARA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RARA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.