Ran BP-M Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403548-ACT

O RANBP9 humano codifica a Ran BP-M, uma proteína de andaime que se associa ao sistema da GTPase Ran e contribui para o transporte nucleocitoplasmático, a integração de sinais e a montagem de complexos macromoleculares. A Ran BP-M tem sido associada à regulação da organização do citoesqueleto e da adesão celular por meio de interações com módulos de sinalização associados a receptores e a quinases, sustentando um controlo dependente do contexto da proliferação e das respostas ao stress. Alterações na expressão de RANBP9 e na conectividade da sua rede têm sido observadas em estudos de biologia do cancro e de vias relacionadas com a neurodegeneração, nos quais pode influenciar programas transcricionais e a estabilidade de proteínas. Estas propriedades tornam o RANBP9 um nó útil para dissecar a comunicação cruzada entre a maquinaria de transporte nuclear, cascatas de sinalização e a proteostase.

Ran BP-M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RANBP9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ran BP-M O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RANBP9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RANBP9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ran BP-M. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RANBP9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ran BP-M no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ran BP-M em células tumorais com expressão de RANBP9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.