Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ran BP-M: sc-403548-ACT

Le gène humain **RANBP9** code **Ran BP-M**, une protéine d’échafaudage (scaffold) associée au système de la GTPase Ran, qui contribue au transport nucléocytoplasmique, à l’intégration des signaux et à l’assemblage de complexes macromoléculaires. Ran BP-M a été impliquée dans la régulation de l’organisation du cytosquelette et de l’adhérence cellulaire via des interactions avec des modules de signalisation associés aux récepteurs et aux kinases, favorisant un contrôle dépendant du contexte de la prolifération et des réponses au stress. Des altérations de l’expression de RANBP9 et de la connectivité de son réseau ont été observées dans des études portant sur la biologie du cancer et sur des voies liées à la neurodégénérescence, où elle peut influencer les programmes transcriptionnels et la stabilité des protéines. Ces propriétés font de RANBP9 un nœud utile pour disséquer les interactions croisées entre la machinerie de transport nucléaire, les cascades de signalisation et la protéostasie.

Ran BP-M Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RANBP9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ran BP-M Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RANBP9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RANBP9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ran BP-M. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RANBP9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ran BP-M au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ran BP-M dans les cellules tumorales présentant une expression de RANBP9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.