Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ran BP-3: sc-405001-ACT

RANBP3 code pour Ran BP-3, une protéine se liant à RanGTP qui agit comme cofacteur de l’export nucléaire dépendant de CRM1/XPO1, contribuant à réguler la distribution nucléocytoplasmique des protéines et des ARN. En modulant les gradients de RanGTP et l’assemblage des complexes d’export, Ran BP-3 participe au contrôle des programmes d’expression génique, de la progression du cycle cellulaire et de la signalisation en réponse au stress via la dynamique du transport nucléaire. Une exportation nucléaire dérégulée est une caractéristique récurrente des cancers et d’autres états prolifératifs ou inflammatoires, ce qui fait de RANBP3 une cible utile pour des études mécanistiques reliant des défauts de transport à des réseaux transcriptionnels altérés. Dans les cellules humaines, la perturbation de l’expression de RANBP3 est couramment utilisée pour explorer la connectivité des voies entre le trafic nucléaire, la régulation transcriptionnelle et la protéostasie.

Ran BP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RANBP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ran BP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RANBP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RANBP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ran BP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RANBP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ran BP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ran BP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de RANBP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.