Ral B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425679

Visão geral

Ralb codifica a pequena GTPase Ral B, um interruptor molecular do tipo Ras que alterna entre estados ligados a GDP e a GTP para regular o tráfego de membranas e a remodelação do citoesqueleto. A Ral B sinaliza por meio de efetores como o complexo exocisto e a RalBP1 para controlar o acoplamento de vesículas, a endocitose, a polaridade celular e a citocinese, e pode interagir com a sinalização de estresse e da imunidade inata por vias associadas à ativação de TBK1. Por meio desses processos, a Ral B influencia programas de proliferação, migração e sobrevivência celular frequentemente estudados no contexto da saída da rede de Ras oncogênica e da invasão de células tumorais. Em modelos murinos, a perturbação de Ralb permite a investigação mecanística de nós de sinalização de pequenas GTPases implicados na biologia do câncer e em fenótipos associados à inflamação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ral B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ralb em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ralb, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ralb na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ral B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ralb para a investigação da sinalização de Ral B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ralb críticos para a função Ral B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ralb para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ral B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ral B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ralb. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ral B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ral B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ralb para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ralb definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.