Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411501

概要

RRAGA は、リソソーム表面における mTORC1 の活性化に細胞内アミノ酸の利用可能性を結び付けるため、RagC/D とヘテロ二量体を形成する Ras 関連低分子 GTPase である Rag A をコードする。GDP 結合型と GTP 結合型の間の制御されたサイクリング、および Ragulator 複合体や GATOR 制御因子との相互作用を通じて、Rag A は mTORC1 基質のリン酸化を制御し、タンパク質合成、オートファジー抑制、代謝リプログラミングを協調させる。Rag GTPase シグナル伝達の破綻と異常な mTORC1 活性は、がん生物学ならびに代謝疾患や神経発達疾患の文脈で関与が示唆されており、RRAGA は栄養感知回路を解析するうえで有用な結節点となる。RRAGA の遺伝学的改変により、リソソーム依存性シグナル伝達および下流の翻訳・オートファジー経路に関する機序研究が可能となる。

Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRRAGA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RRAGA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RRAGAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rag Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rag Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RRAGA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rag Aの機能に不可欠なRRAGAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RRAGAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRag A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RRAGA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rag A HDRプラスミド（h）および Rag A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRRAGAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRRAGA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。