Particules Lentivirales d'Activation (m2) Rac 1: sc-422573-LAC-2

Le gène murin Rac1 code la petite GTPase Rac1, régulateur central de la dynamique du cytosquelette d’actine, qui contrôle la formation des lamellipodes, la migration cellulaire, l’adhésion et la polarité en alternant entre les états liés au GDP et au GTP. La signalisation de Rac1 intègre des signaux provenant des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs couplés aux protéines G (RCPG) afin de coordonner des voies telles que PI3K–AKT, PAK–MAPK et la production d’espèces réactives de l’oxygène dépendante de la NADPH oxydase, modulant ainsi la prolifération, la survie et les fonctions de l’immunité innée. Une activité de Rac1 dérégulée est associée à une morphogenèse tissulaire aberrante, à des réponses inflammatoires et à des programmes de signalisation oncogéniques, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de l’invasion tumorale, de la biologie vasculaire et du neurodéveloppement. L’édition génomique de Rac1 chez la souris permet de disséquer les mécanismes des réseaux de GTPases de la famille Rho in vivo et dans des cellules en culture, en appui à des tests de remodelage du cytosquelette, de transduction du signal et de transitions d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales Rac 1 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Rac1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Rac 1 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Rac1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Rac 1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Rac1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.