Plasmide Double Nickase (h) Rac 1: sc-400175-NIC

RAC1 code pour Rac1, une petite GTPase de la famille Rho qui alterne entre un état actif lié au GTP et un état inactif lié au GDP afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et la polarité cellulaire. Rac1 transmet ses signaux via des effecteurs tels que les kinases PAK, le complexe régulateur WAVE et la NADPH oxydase, en intégrant des signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase et des intégrines pour réguler la migration, l’adhérence, l’endocytose et la production d’espèces réactives de l’oxygène. En biologie humaine, une activité dérégulée de RAC1 est liée à des dynamiques épithélio-mésenchymateuses altérées, à des programmes d’invasion et au trafic des cellules immunitaires, et a été associée à la progression tumorale, à des troubles du neurodéveloppement et à des phénotypes inflammatoires. Ces liens de voie de signalisation font de RAC1 un nœud largement utilisé pour étudier, dans des travaux mécanistiques, le contrôle du cytosquelette, les interactions croisées avec la voie MAPK et les transitions d’état cellulaire.

Rac 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.