Rac 1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400175-NIC

RAC1は、Rhoファミリーに属する低分子GTPアーゼであるRac1をコードしており、活性型（GTP結合）と不活性型（GDP結合）の状態を循環しながら、アクチン細胞骨格の再編成、膜ラッフリング、細胞極性の制御を協調的に担います。Rac1は、PAKキナーゼ、WAVE制御複合体、NADPHオキシダーゼなどのエフェクターを介してシグナルを伝達し、受容体型チロシンキナーゼやインテグリンからの入力を統合して、細胞移動、接着、エンドサイトーシス、活性酸素種（ROS）産生を調節します。ヒトの生物学においては、RAC1活性の異常が上皮―間葉動態の変化、浸潤プログラム、免疫細胞のトラフィッキングの異常と関連し、がん進展、神経発達障害、炎症性表現型との関連も報告されています。これらの経路上のつながりから、RAC1は機構研究において、細胞骨格制御、MAPKとのクロストーク、細胞状態遷移を解析するための汎用的なハブ（ノード）として広く用いられています。

Rac 1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。