Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 33B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404070
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 33B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Rab 33B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 33B Antibody (RR-3): sc-81920
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 33B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404070 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RAB33B codifica la piccola GTPasi Rab 33B, un membro della famiglia Rab che coordina gli eventi di traffico di membrana all’interfaccia tra Golgi e reticolo endoplasmatico (ER). Rab 33B regola la formazione delle vescicole, lo smistamento del carico e l’omeostasi del Golgi, ed è stata implicata in fasi di traffico legate all’autofagia che influenzano la dinamica degli organelli. Attraverso queste funzioni contribuisce all’organizzazione della via secretoria e alla fedeltà del trasporto intracellulare, processi spesso alterati in fenotipi di tipo neurosviluppo e neurodegenerativo. Un’alterata funzione di RAB33B è stata associata a disturbi scheletrici e dello sviluppo a carattere sindromico, a sostegno della sua rilevanza nello studio dell’omeostasi cellulare dipendente dal traffico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 33B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAB33B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAB33B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAB33B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 33B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAB33B per lo studio della segnalazione di Rab 33B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RAB33B critici per la funzione di Rab 33B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAB33B per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Rab 33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab 33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAB33B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 33B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab 33B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAB33B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAB33B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.