Plasmide Double Nickase (h) QIP1: sc-405442-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) QIP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide QIP1 Double Nickase (h) et le plasmide QIP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KPNA4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: QIP1 Antibody (3D10): sc-101547
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) QIP1 | sc-405442-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) QIP1 | sc-405442-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KPNA4 code pour la sous-unité alpha 4 des karyophérines (QIP1), un adaptateur de la famille des importines-α qui reconnaît les signaux classiques de localisation nucléaire et recrute l’importine-β afin de permettre la translocation des protéines à travers le complexe du pore nucléaire. En contrôlant le trafic nucléo-cytoplasmique, KPNA4 module des programmes transcriptionnels, la progression du cycle cellulaire et les voies de signalisation sensibles au stress, en régulant l’accès au noyau de facteurs de transcription clés et de protéines régulatrices. Des altérations de la dynamique d’import nucléaire impliquant KPNA4 ont été associées, dans des contextes pertinents pour le cancer, à une prolifération et une invasion dérégulées ainsi qu’à des perturbations des voies de maintien du génome, et peuvent influencer les réponses cellulaires aux dommages de l’ADN et aux signaux inflammatoires. En tant que nœud central du transport nucléaire, KPNA4 est fréquemment étudiée pour décrypter l’architecture de voies dépendant d’une localisation nucléaire régulée.
QIP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KPNA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KPNA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KPNA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KPNA4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.