PTPRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406293

概要

PTPRH（protein tyrosine phosphatase receptor type H）は、細胞膜を貫通する受容体様のホスファターゼであり、細胞表面におけるチロシンリン酸化シグナルを調節することで、増殖、接着、細胞運動を制御する下流経路の形成に関与します。受容体型チロシンキナーゼの活性およびそれに関連するMAPKやPI3K/AKTシグナル出力に拮抗することにより、PTPRHは増殖因子への応答性や上皮細胞の挙動に影響を及ぼし得ます。PTPRHの発現や活性の異常は、複数のがん種において腫瘍化に関連するシグナル状態の変化や腫瘍関連表現型と結び付けられており、リン酸化依存的な制御ネットワークを解析するうえで重要な分子です。また膜結合型ホスファターゼとして、細胞外からの刺激と細胞内のキナーゼ／ホスファターゼ回路の間でどのようにシグナルが統合されるかを研究する際にも有用です。

PTPRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTPRH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTPRH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTPRHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PTPRHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PTPRHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTPRH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PTPRHの機能に不可欠なPTPRHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTPRHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PTPRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPTPRH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTPRH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PTPRH HDRプラスミド（h）および PTPRH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTPRHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTPRH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。