Plasmide CRISPR d'Activation (m) PTPσ: sc-422531-ACT

Le gène murin **Ptprs** code la protéine tyrosine phosphatase sigma (**PTPσ**), une phosphatase de type récepteur enrichie dans les contextes neuronaux et épithéliaux, qui intègre les signaux de la matrice extracellulaire à des événements intracellulaires de déphosphorylation afin de moduler l’adhérence cellulaire, la croissance des neurites, le guidage axonal et l’organisation synaptique. PTPσ interagit avec des protéoglycanes à héparane sulfate et à chondroïtine sulfate, reliant la matrice péricellulaire au remodelage du cytosquelette et à des modules de signalisation qui influencent le comportement du cône de croissance et la plasticité des circuits. En modulant des voies dépendantes de la phosphorylation, **Ptprs** contribue à une signalisation dépendante du contact et à la mise en place des tissus, et une activité altérée de PTPσ a été associée dans la littérature à des phénotypes neurodéveloppementaux, à une régénération déficiente et à une communication cellule–cellule dérégulée. Ces caractéristiques font de **Ptprs** une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation contrôlée par les phosphatases dans la connectivité neuronale et la régulation du microenvironnement.

PTPσ Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ptprs sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTPσ Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ptprs dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ptprs, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTPσ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ptprs natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTPσ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTPσ dans les cellules tumorales présentant une expression de Ptprs silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.