PTPσ CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422531-ACT

マウスPtprsは、プロテインチロシンホスファターゼ・シグマ（PTPσ）をコードする。PTPσは神経系および上皮系の環境で豊富に発現する受容体型ホスファターゼであり、細胞外マトリックスからの手掛かりを細胞内の脱リン酸化反応と統合することで、細胞接着、神経突起伸長、軸索誘導、シナプス組織化を制御する。PTPσはヘパラン硫酸およびコンドロイチン硫酸プロテオグリカンと相互作用し、細胞周囲マトリックスを細胞骨格リモデリングやシグナル伝達モジュールに結び付けて、成長円錐の挙動や神経回路の可塑性に影響を与える。リン酸化依存的経路の調節を介して、Ptprsは接触依存的シグナル伝達や組織パターニングにも寄与し、PTPσ活性の変化は文献上、神経発達表現型、再生不全、細胞間コミュニケーションの破綻と関連づけられている。これらの特性により、Ptprsは神経回路の結合性や微小環境の制御における、ホスファターゼ依存シグナルの機構研究に有用な標的となる。

PTPσ CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ptprsの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTPσ CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ptprs 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPtprs転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTPσの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPtprs遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTPσ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPtprs発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTPσ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。