Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PTH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401280
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PTH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PTH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PTH Anticuerpo (H-7): sc-398856
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PTH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401280 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La hormona paratiroidea (PTH) es un péptido endocrino producido principalmente por las células principales de las glándulas paratiroides, que mantiene la homeostasis sistémica del calcio y del fosfato actuando sobre el riñón y el hueso. Al unirse a PTH1R, la PTH activa las vías de señalización Gs/AMPc/PKA y Gq/PLC, modulando el acoplamiento osteoblasto–osteoclasto y el manejo tubular renal del calcio y del fosfato, incluida la regulación de la activación de la vitamina D. La señalización impulsada por la PTH se integra con redes del metabolismo mineral como las vías FGF23–Klotho e influye en programas transcripcionales posteriores en tipos celulares esqueléticos y renales. La expresión o señalización desregulada de la PTH se asocia con trastornos del equilibrio de iones minerales y del remodelado óseo, lo que proporciona un punto de entrada útil para estudios mecanísticos en modelos de endocrinología, biología esquelética y nefrología.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PTH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PTH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTH para la investigación de la señalización de PTH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PTH críticos para la función de PTH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PTH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PTH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PTH (h) y el plásmido HDR PTH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.