Particules Lentivirales d'Activation (m) PTEN: sc-422475-LAC

Le gène murin *Pten* code PTEN, une phosphatase lipidiques et protéique à double spécificité qui contrebalance la signalisation PI3K en déphosphorylant le PIP3 en PIP2, limitant ainsi l’activité de la voie AKT/mTOR. En régulant la croissance, la survie, le métabolisme et la migration cellulaires, PTEN contribue au maintien de l’homéostasie tissulaire et à la préservation de la stabilité génomique dans de multiples contextes cellulaires. Des perturbations du dosage de PTEN ou de l’intensité de sa signalisation sont associées à des programmes prolifératifs aberrants ainsi qu’à des phénotypes immunitaires et neuronaux altérés, ce qui en fait un nœud central dans l’étude de la signalisation oncogénique et de la biologie du développement. PTEN interagit également avec des voies contrôlant l’autophagie, la polarité cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN, permettant d’explorer les mécanismes de dialogue entre voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales PTEN (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pten dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PTEN (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pten, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PTEN. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pten ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.