Particules Lentivirales d'Activation (m) PSS2: sc-424258-LAC

Le gène murin **Ptdss2** code la **phosphatidylsérine synthase 2 (PSS2)**, une enzyme membranaire clé du réticulum endoplasmique qui catalyse la production de phosphatidylsérine via des réactions d’échange de base, contribuant au maintien de l’homéostasie des phospholipides cellulaires. La phosphatidylsérine est essentielle à la biogenèse des membranes, à l’identité des organites, au trafic vésiculaire et à des processus de signalisation liés à l’apoptose et à la reconnaissance immunitaire, et elle participe aux propriétés structurales et fonctionnelles des membranes associées aux mitochondries. L’activité de PSS2 relie les voies du métabolisme lipidique aux réponses au stress cellulaire et à la bioénergétique en modulant la composition membranaire et les échanges lipidiques entre organites. Une dérégulation du métabolisme de la phosphatidylsérine a été associée à une altération de la signalisation membranaire et à un déséquilibre lipidique, pertinents dans des modèles de maladies axés sur le métabolisme et la neurobiologie.

Les particules d'activation lentivirales PSS2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ptdss2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PSS2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ptdss2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PSS2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ptdss2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.