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PSS2慢病毒激活颗粒(m) | sc-424258-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Ptdss2 基因编码磷脂酰丝氨酸合成酶 2(PSS2)。PSS2 是位于内质网膜上的关键酶,通过碱基交换反应催化磷脂酰丝氨酸的生成,从而维持细胞磷脂稳态。磷脂酰丝氨酸对于膜的生物发生、细胞器身份维持、囊泡运输以及与细胞凋亡和免疫识别相关的信号过程至关重要,并有助于线粒体相关膜(MAM)的结构与功能特性。PSS2 的活性通过塑造膜组成并促进细胞器间脂质交换,将脂质代谢通路与细胞应激反应和生物能量学联系起来。磷脂酰丝氨酸代谢失调与膜信号改变及脂质失衡有关,在代谢疾病与神经生物学相关的疾病模型中具有重要意义。
PSS2 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Ptdss2 表达。
PSS2 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Ptdss2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PSS2表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Ptdss2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。